Kyselinová proteáza

Aplikace a princip

Tato kyselá proteáza se používá ke stanovení proteolytické aktivity přípravků odvozených od Aspergillus oryzae var a Aspergillus niger var, vyjádřené jako jednotky hemoglobinu na bázi tyrosinu (HUT), a lze ji použít ke stanovení aktivity jiných proteáz při pH 4,7 . Test je založen na 30minutové enzymatické hydrolýze hemoglobinového substrátu při pH 4,7 a 40 °. Nehydrolyzovaný substrát se vysráží kyselinou trichloroctovou a odstraní se filtrací. Spektrofotometricky se stanoví množství solubilizovaného hemoglobinu ve filtrátu.

Činidla a roztoky kyselých proteáz
Hemoglobin Použijte hemoglobinový substrátový prášek (Sigma Chemical Co., katalogové číslo H2625) nebo podobný vysoce kvalitní materiál, který je zcela rozpustný ve vodě.
Acetátový pufrovací roztok Rozpusťte 136 g octanu sodného (NaC2H3O2 · 3H2O) v dostatečném množství vody na 500 ml. 25,0 ml tohoto roztoku se smíchá s 50,0 ml 1 M kyseliny octové, zředí se na 1000 ml vodou a promíchá se. Hodnota pH tohoto roztoku by měla být 4,7 ± 0,02.
Roztok substrátu Přeneste 4,0 g hemoglobinu do 250ml kádinky, přidejte 100 ml vody a míchejte 10 minut, aby se rozpustil. Ponořte elektrody pH metru do roztoku a za stálého míchání upravte pH na 1,7 přidáním 0,3 N kyseliny chlorovodíkové. Po 10 minutách se upraví pH na 4,7 přidáním 0,5 M octanu sodného. Roztok se převede do odměrné baňky na 200 ml, zředí se vodou na objem a promíchá se. Toto řešení je stabilní asi 5 dní, když je chlazeno.
Roztok kyseliny trichloroctové Rozpusťte 140 g kyseliny trichloroctové v asi 750 ml vody. Roztok se převede do odměrné baňky na 1000 ml, zředí se vodou na objem a důkladně se promíchá.

Příprava vzorku Rozpusťte určité množství vzorku v pufru z acetátového pufru a vytvořte roztok obsahující v každém ml 9 až 22 HUT. (Taková koncentrace způsobí odečtení absorbance v níže uvedeném postupu v preferovaném rozsahu 0,2 až 0,5.)

Postup kyselé proteázy
Pipetujte 10,0 ml roztoku substrátu do každé ze série zkumavek o rozměrech 25 x 150 mm: jeden pro každý enzymový test a jeden pro slepý pokus se substrátem. Zkumavky se zahřívají ve vodní lázni na 40 ° po dobu asi 5 minut. Do každé zkumavky, s výjimkou slepého pokusu se substrátem, přidejte 2,0 ml přípravy vzorku a začněte měřit čas v okamžiku přidání roztoku; přidejte 2,0 ml pufrového roztoku acetátu do prázdné zkumavky se substrátem. Uzavřete zkumavky gumovými zátkami č. 4 a každou zkumavku po dobu 30 s jemně poklepávejte proti dlani, aby se promíchala. Každá zkumavka se zahřívá ve vodní lázni na 40 ° přesně 30 minut a poté se do každé zkumavky rychle napipetuje 10,0 ml roztoku kyseliny trichloroctové. Každou zkumavku intenzivně protřepávejte proti zátce po dobu asi 40 s a poté nechejte 1 hodinu vychladnout na pokojovou teplotu, přičemž každou zkumavku během této doby protřepávejte proti zátce v intervalech 10 až 12 minut. Připravte enzymové slepé vzorky následujícím způsobem: Zahřejte v samostatných zkumavkách 10,0 ml roztoku substrátu a asi 5 ml přípravku na přípravu vzorku ve vodní lázni po dobu 30 minut, poté přidejte 10,0 ml roztoku kyseliny trichloroctové do roztoku substrátu a dobře protřepejte. po dobu 40 s, a k této směsi se přidají 2,0 ml předehřátého Přípravku vzorku. Znovu protřepejte a ochlaďte při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, protřepávejte v 10- až 12minutových intervalech.
Na konci 1 hodiny každou zkumavku důkladně protřepejte a přefiltrujte přes 11 cm Whatman č. 42 nebo ekvivalentní filtrační papír, přičemž první polovinu filtrátu přefiltrujte přes stejný papír. Stanovte absorbanci každého filtrátu v 1 cm kyvete při 275 nm pomocí vhodného spektrofotometru pomocí filtrátu z blanku substrátu k vynulování přístroje. Opravte každé čtení odečtením příslušného slepého čtení enzymu a zaznamenejte takto získanou hodnotu jako AU.
[Poznámka: Pokud není dosaženo hodnoty korigované absorbance mezi 0,2 a 0,5, opakujte test podle potřeby s použitím více či méně enzymatického přípravku.]

Standardní křivkový přenos 100,0 mg L-tyrosinu, chromatograficky čistého nebo ekvivalentního (Aldrich Chemical Co.), předem vysušeného do konstantní hmotnosti, do odměrné baňky na 1000 ml. Rozpustí se v 60 ml 0,1 N kyseliny chlorovodíkové. Když je L-tyrosen zcela rozpuštěn, zřeďte roztok na objem vodou a důkladně promíchejte. Tento roztok obsahuje 100 ug tyrosinu v 1,0 ml. Připravte další tři ředění z tohoto zásobního roztoku tak, aby obsahoval 75,0, 50,0 a 25,0 µg tyrosinu na ml. Stanoví se absorbance čtyř roztoků při 275 nm v 1 cm kyvetě na vhodném spektrofotometru proti 0,006 N kyselině chlorovodíkové. Připravte graf absorbance versus koncentrace tyrosinu. Určete sklon křivky z hlediska absorbance na μg tyrosinu. Vynásobte tuto hodnotu 1,10 a zaznamenejte ji jako AS. Je třeba získat hodnotu přibližně 0,0084.

Výpočet kyselé proteázy
Jedna HUT jednotka proteolytické (kyselá proteáza) aktivita je definována jako takové množství enzymu, které produkuje za 1 minutu za stanovených podmínek hydrolyzát, jehož absorbance při 275 nm je stejná jako absorbance roztoku obsahujícího 1,10 ug / ml tyrosinu v 0,006 N kyselině chlorovodíkové.
HUT na g původního enzymatického přípravku se vypočítá z rovnice

HUT / g = (AU / AS) × (22/30 W)

ve kterém 22 je konečný objem zkoušeného roztoku; 30 je reakční doba v minutách; a W je hmotnost původního odebraného vzorku vg.

[Poznámka: Hodnota AS za pečlivě kontrolovaných a standardizovaných podmínek je 0,0084; tato hodnota může být použita pro rutinní práci namísto hodnoty získané ze standardní křivky, ale pro přesnější výsledky a v případě pochybností by měla být použita přesná hodnota vypočítaná ze standardní křivky.]

OSVĚDČENÍ O ANALÝZE

jméno výrobku	Kyselinová proteáza
Jiné jméno	N / A	Země původu	Čína
Kmen	Aspergillus oryzae	Datum výroby	13. KVĚTNA 2019
Číslo šarže	SP19050903	Datum spotřeby	12. KVĚTNA 2021
Balík	25 kg / vědro	Množství	100 kg
PROTOKOL	SPECIFIKACE	VÝSLEDEK	METODA
FYZIKÁLNÍ A CHEMICKÁ ANALÝZA
Popis	hnědý prášek	Vyhovuje	Vizuální
Zápach a chuť	Charakteristická vůně a chuť	Vyhovuje	Chuť
Vlhkost	NMT 7%	5,1%	Analyzátor vlhkosti
IDENTIFIKACE
Identifikovatelná aktivita	Pozitivní na aktivitu bromelainu	Vyhovuje	Interní
AKTIVITA
Proteázová aktivita	500 000 NLT HUT / g	508 270 HUT / g	FCC VII
MIKROBIOLOGICKÉ
Celkový počet bakterií Koliformní bakterie (CFU / g) Plísně a kvasnice E-coli Salmonella Zlatý stafylokok Pseudomonas aeruginosa	NMT 3 000 CFU / g NMT 30 CFU / g NMT 100 CFU / g Nepřítomen Nepřítomen Nepřítomen Nepřítomen	500 CFU / g - 10 CFU / g - 10 CFU / g Nezjištěno Nezjištěno Nezjištěno Nezjištěno	FDA BAM Online Ch.3 FDA BAM online kap.4 FDA BAM Online Ch. 2 FDA BAM online kap.4 FDA BAM Online Ch.5 FDA BAM online kap.12 AOAC
TĚŽKÉ KOVY
Vést Rtuť Kadmium Arsen	NMT 3 ppm NMT 0,1 ppm NMT 1 ppm NMT 1 ppm	0,21 ppm ＜0,1 ppm 1 ppm ＜1ppm	USP <231> USP <231> USP <231> USP <231>
Skladování: Skladujte na chladném a suchém místě chráněném před světlem. Pokud buben nepoužíváte, udržujte jej v blízkosti. Závěr: Odpovídá standardům IU. Doba použitelnosti: Doba použitelnosti kyselé proteázy za předepsaných skladovacích podmínek a vzduchotěsného obalu bude 2 roky. Produkt splňuje výše uvedené specifikace Schváleno autorizovaným signatářem RICKY H. ZHU

*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of kyselá proteáza. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

Balení a skladování

Pevný obal na balení potravin, 25 kg / barel.

Kyselinová proteáza by měla být skladována na suchých, chladných a dobře větraných místech mimo dosah slunce a tepla.

Způsob platby :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay Later, LC atd.